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【热点】最新:韩春雨回应方舟子的质疑
令狐小冲 2016-07-06
导语

清者自清,一切自有分说!


6月30日,方舟子发文《河北科技大学韩春雨“诺贝尔奖级”实验的重复性问题》,质疑韩春雨的突破性研究成果NgAgo基因编辑技术,引起了舆论的强烈反响。7月2日,韩春雨老师在百度贴吧“国际米兰吧”发帖回复了各项质疑。

(原贴地址:http://tieba.baidu.com/p/4645810480?pn=1,著作权归发帖人

贴吧网友转发方舟子的质疑:

“不久前河北科技大学韩春雨在《自然·生物技术》发表论文报告了一种基因编辑新方法NgAgo,在国内轰动一时。被《知识分子》作为末流学校土博士也能做世界一流科研的典型,国内其他媒体随后跟进宣传,甚至称之为“诺贝尔奖级”的研究成果。这几天我陆续收到几家实验室的研究人员的来信,反映重复不出韩春雨论文中最关键的图4结果(切割基因组,T7E1和测序),呼吁我关注一下这事。

有些人已在网上生物专业论坛公开讨论此事,报告他们没法重复该实验,询问有谁重复出来了。目前还未见有人反映重复出了图4结果。有的能够重复论文中的图3结果(FACS和Western Blot),但那有可能是假阳性。据听报告的人说,韩春雨在北大和遗传所的报告上都强调,他目前的NgAgo是初级版、需要高超的实验技巧、等他推出2.0版和Smart版。这些说法跟他 在论文里的描述是矛盾的。因为他描述的只是个并不复杂的转染实验,T7E1和测序也都是现成的技术,并不需要高超的实验技巧,按照其提供的步骤应该是不难被重复出来的。

韩春雨获悉有人重复不出其实验结果后,不是解答疑惑,而是谩骂这些人是“跳梁小丑”、是搞别的基因编辑技术(CRISPR)的人的抹黑,威胁要对他们进行人肉搜索。我当然不怕被人肉,也不怕挨骂,所以在此问几个问题:“

以下为韩老师的回复:

我目前仍只有一个做实验的小团队,无法做好服务性工作,一天十几个个电话我都是重复的以下内容:

----所谓高超的技巧,其实也很简单,细胞做好检测,不要有寄生菌污染,不要有支原体污染(Ago系统对污染特别敏感 ---特别是单转guide假阳性---我非常确定在没有污染的情况下,单转guid不会影响GFP表达,假阴性也大多因为细胞污染,假阳性和假阴性我都遇到过,国内买的细胞我就不吐槽了),转染用的质粒质量要好(可用30ngGFP转细胞,若是均一且效率高表明质量好,强弱不均一则表明质量差,越不均一表明质量越差),guide磷酸化完全(没有磷酸化不能load和切割---谢谢印证我的Fig2结果,至于怎么检测,自己跑个PAGE看看---),特别的,对于Fig4,也是几乎惟一算是有难度的,就是控制转染时的细胞密度和用血清控制细胞生长,时间稍长,毕竟NgAgo未经过系统的密码子优化---照着online method上protocol for genome editing and T7E1做(小经验,PCR最好不要有引物二聚体,如果引物二聚体多请重设引物;PCR产物直接回收最好不跑胶回收,可能跟ago切24bp有关,设好对 照!)

---银染分辨率高,可以排除T7E1假阳性,能做出预期条带后请用PCR产物去测序--------欢迎大家广泛使用此系统,并分享成功经验和失 败教训。附,addgen上的质粒,可以直接用作基因组编辑。再次强调,不加NgAgo,就能抑制GFP,是假阳性,是细胞出问题了(谢天谢地不但我自己而且审稿人也有这个对照)出现假阳性的细胞切基因组就没戏了。

对于Fig4,若是不习惯做银染,也可以 直接做KI:doner 用GFPcoden+polyA signal,前后加几个保护性的碱基---从GFP-N1扩出来连到T-vector上,再从此doner-Tvector上扩(防止GFP-N1污染 的假阳性)出来纯化,500-800ng共转(for each well of 24 well plate)。

许多网友力挺韩老师,给他加油

韩老师针对知乎上的一些质疑,也做出了回复,并吐槽“我这么苦口婆心”

方舟子的微博回应

方舟子自然不甘示弱,在微博做出回应,但是且不论孰是孰非,他这种语气真的有违科学的精神:

总之,韩老师坦诚的态度值得尊敬。我们期待韩老师能早日完成2.0版和Smart版的技术,破除这些质疑。

(图片来自新浪微博,百度贴吧,本文来自:http://www.london-science.com/archives/565

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作者 令狐小冲

博士生

清华大学

活跃作者
  • 爱因斯坦 科研工作者 北京航空航天大学 博士
  • 梅西 本科生 北京工业大学 本科
  • 金陵 本科生 北京大学 本科


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